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层析色谱柱是一种用于分离和纯化化合物的色谱技术

更新时间:2023-10-18      点击次数:301
  层析色谱柱是一种用于分离和纯化化合物的色谱技术。它通常由一根固定相色谱柱和一个可移动的流动相色谱柱组成。在层析色谱柱中,固定相色谱柱通常由一系列不同直径的颗粒组成,这些颗粒具有不同的分子量和孔隙率。流动相色谱柱则通常由一系列具有不同极性和流速的溶剂组成,这些溶剂可以冲洗固定相色谱柱,并将不同的化合物从固定相色谱柱中分离出来。
 
  化合物的吸附和解吸过程是基于范德华力和氢键作用。化合物分子在固定相色谱柱上的吸附是由于分子表面上的各种化学和物理性质的差异,这些差异导致了分子在固定相色谱柱上的吸附能力不同。吸附作用可以导致化合物的电性、氢键和疏水性等性质发生变化。而化合物在流动相溶剂中的溶解度则取决于其分子量和化学结构等因素。
 
  流动相溶剂可以通过冲洗固定相色谱柱来将化合物从固定相色谱柱中分离出来。这个过程类似于吸附色谱柱中的吸附过程,只是在这种情况下,分离过程是基于溶质在固定相色谱柱上的吸附强度差异。流动相溶剂的冲洗速度和流速可以调节,以便在不同的化合物之间实现分离效果。

层析色谱柱

 


 
  层析色谱柱采用层析法,是一种以分配平衡为机理的分配方法。薄层色谱是在被洗涤干净的玻板(10×3cm左右)上均匀的涂一层吸附剂或支持剂,待干燥、活化后将样品溶液用管口平整的毛细管滴加于离薄层板一端约1cm处的起点线上,晾干或吹干后置薄层板于盛有展开剂的展开槽内,浸入深度为0.5cm。待展开剂前沿离顶端约1cm附近时,将色谱板取出,干燥后喷以显色剂,或在紫外灯下显色。
 
  层析色谱柱操作的几大要点须知:
 
  1.在滤纸条上端边缘约1厘米的中央剪一小孔。
 
  2.将滤纸条平放于洁净的纸上,在距离滤纸下端1cm处用铅笔轻画一横线,并在横线的中央画一直径为2mm的小圆圈。
 
  3.用毛细管吸取氨基酸混合液,在滤纸条下端的小圆圈内点样。
 
  4.取干燥大试管,加入被水饱和的酚溶液10ml,注意勿使溶液沾到试管壁上,将试管垂直固定。
 
  5.在距滤纸条下端0.5cm处穿大头针。从滤纸条上端小孔处穿棉线并左右分开,调节线的高度使滤纸垂直悬于试管内且下湍浸入溶液0.5cm,注意勿使点样点浸入溶液中,亦勿使滤纸条接触试管壁。
 
  6.此时即可看到溶剂向上移动,溶剂升到一定高度时,小心将纸条取出,以铅笔标出溶剂上升的前沿。
 
  7.将滤纸条两端,用大头针钉在小木框上,吹干后用喷雾器均匀地喷一层0.2%三酮乙醇溶液,然后再将滤纸条吹干,即可看到纸上显出三色点,每个色点代表一种氨基酸。
 
  8.分别测量并计算三种氨基酸的Rr,再根据教师供给的值确定此三个色点各为何种氨基酸。
 
  9.留在试管内的酚溶剂切勿弃去,塞紧塞子。