咨询热线

400-8816-128

当前位置:首页  >  技术文章  >  针对工艺强化/集成平台径向流色谱法在抗体纯化上的应用

针对工艺强化/集成平台径向流色谱法在抗体纯化上的应用

更新时间:2022-12-01      点击次数:853
  摘要
 
  径向流色谱(RFC)(Fig1)是一种经过验证的快速、低压色谱技术,对蛋白质的快速纯化非常有效。RFC柱的设计使它适用于所有规模(实验室,中试或生产级别)的高通量吸附分离,另外它支持所有市场上的商用树脂。RFC的设计支持稳定的“快速”吸附分离,易于适应全新的工艺强化/集成平台。

 

 

 
  本研究采用径向流色谱技术,使用一种市售Protein A树脂对重组人源IgG1(CHO细胞系培养)进行纯化,通过对负载能力,流量的影响和超载条件的探索,对其数据进行展示及可能实现的工艺强化/集成平台进行讨论。
 
01  方法
 
  实验材料
 
  1) 收获澄清的IgG1(pH ~7, 1.3-1.5 mg/mL)
 
  Sepragen QuantaSep系统:
 
  2) QuantaSep1000LX 纯化设备(Fig3)

 

 
  3) 商用Protein A树脂,动态载量~30 mg/mL
 
  4) 2.5 cm床深(100 mL)径向流柱(Fig2)
 
  5) 平衡/洗涤缓冲液:25 mM Tris(pH 6-7)
 
  6) 洗脱缓冲液:10 mM Glycine(pH 3.5)
 
  7) 再生缓冲液:50 mM NaOH
 
02  运行
 
  100 mL SuperFlo径向流柱(填充载量30 mg/mL的市售Protein A)
 
  纯化平台:Sepragen QuantaSep纯化系统(Fig3)
 
03  色谱程序与图谱
 

 

 

 
04  纯化筛选
 
  实验从合作公司获得的澄清IgG1开始,考察了在流量略有变化情况下的负载能力,一段时间后对收获的样品进行过滤,未观察到降解沉淀现象。
 
  实验结果见色谱图(Fig4),数据汇总见Table 2。

 

 
05  对结果进行讨论并将RFC实现工艺强化/集成
 
  为了提高生产力同时缩短工艺周期,工艺集成化和一体化是生物技术产业的趋势。在工艺强化和集成系统中,径向流柱(RFC)与传统轴向流柱相比,可以减少生产周期(Table 3)
 
  与轴向流柱推荐的(按照树脂制造规格)300 cm/hr(75 L/hr)的流速相比,RFC支持更高的流速(150 L/hr)。即使采用更高的理论速率500cm /hr,轴向流柱也只能达到124 L /hr。
 
  RFC的设计可以降低柱压1.,灵活的完成负载循环,解决更多不稳定样品的负载问题。
 
  径向流柱支持多柱滑行纯化系统在较低的压力下以较高的流速运行,是一个更具有成本效益的过程。此外,RFC支持任何市售树脂,在开发的工作完成后,树脂可快速转移到RFC平台2.。

 

 
  将本研究中获得的RFC流量与轴向柱理论高流量(300/500 cm/hr)进行比较,径向流柱过程更快,而更快的速度将减少操作时间。

 

06  结论
 
  径向流色谱法是抗体纯化和工艺强化平台的一个理想选择。
 
  它支持:
 
  !高流速 !高回收率(防止样品沉淀降解)大大减少纯化工作时长
 
  在这项小型抗体纯化研究中,我们在22-30 cv/hr的三个高范围内获得了90+%的高回收率
 
  流速明显高于传统轴向流柱
 
  支持使用任何市售树脂
 
  低柱压下的高流量
 
  参考文献
 
  1) Comparison of Radial and Axial Flow Chromatography for Monoclonal Antibody Downstream Processing at Bench and Pilot Scales American Journal of Biochemistry and Biotechnology, 2012, 8 (4), 255-262           2) Sepragen website leaning center